液相色谱仪操作及原理
工作原理：流动相通过输液泵流经进样阀，与样品溶液混合，流经色谱柱，在色谱柱中进行吸附、分离，最后每一组分分别经过检测器转变为电讯号，在色谱工作站上出现相应的样品峰。液相色谱仪操作过程：1、开机操作：①打开液相色谱仪电源，用Harb相连接时，注意Harb电源，打开计算机，打开Bootp Server(一般启动时已打开）。②自上而下打开个组件电源，Bootp Server里显示有信号时（有六行字符），打开工作站（先打开Online)。③打开冲洗泵头的10%异丙醇溶液的开关（需用针捅抽），控制流量大小，以能流出的Z小流量为准。④注意各流动相所剩溶液的容积设定，若设定的容积低于Zdi限会自动停泵，注意洗泵溶液的体积，及时加液。⑤使用过程中要经常观察液相色谱仪工作状态，及时正确处理各种突发事件。2、先以所用流动相冲洗系统一定时间（如所用流动相为含盐流动相，必须先用水冲洗20分钟以上再换上含盐流动相），正式进样分析前30min左右开启D灯或W灯，以延长灯的使用寿命。3、建立色谱操作方法，注意保存为自己命名的Method，勿覆盖或删除他人的方法及实验结果。4、使用液相色谱仪手动进样器进样时，在进样前和进样后都需用洗针液洗净进样针筒，洗针液一般选择与样品液一致的溶剂，进样前必须用样品液清洗进样针筒3遍以上，并排除针筒中的气泡。5、溶剂瓶中的沙芯过滤头容易破碎，在更换流动相时注意保护，当发现过滤头变脏或长菌时，不可用超声洗涤，可用5%稀硝酸溶液浸泡后再洗涤。6、实验结束后，一般先用水或低浓度甲醇水溶液冲洗整个管路30分钟以上，再用甲醇冲洗。冲洗过程中关闭D灯、W灯。7、关机时，先关闭泵、检测器等，再关闭工作站，然后关机，Z后自下而上关闭液相色谱仪各组件，关闭洗泵溶液的开关。8、使用者须认真履行液相色谱仪使用登记制度，出现问题及时向老师报告，不要擅自拆卸仪器。
高效液相色谱仪操作流程
高效液相色谱仪操作流程为开机、超声、排气、走基线。1、开机前先将流动相过滤和超声：水流动相用混合滤膜（0.2μm）过滤，有机流动相用有机滤膜过滤，之后超声脱气15-20分钟。（过滤的目的是除去流动相里的杂质，以免杂质进入色谱柱堵塞色谱柱；超声的目的是排除流动相里面的气体，以防气体进入色谱柱损害色谱柱，影响柱效能）注意：试验过程中由于只有0.45μm的混合滤膜，第一次使用时感觉效果不好，于是过滤水时同时使用两张混合滤膜过滤水流动相。2、超声结束后，将流动相放置到规定位置（1号泵接水流动相，2号泵接有机流动相），开机逐个排气（先启动泵，排气结束后再打开检测器）。3、排气结束后，关闭所有排气阀。先用纯有机流动相冲洗色谱柱20-30分钟，基线走稳之后，再打开水流动相（注意：水流动相和有机流动相流速之和为1ml/min），继续走基线，直到基线平稳。注意：实验结束后，再用纯有机流动相冲洗色谱柱20-30分钟，冲出色谱柱内残留的样品物质，预防长时间不使用仪器样品的残留物质沉积在色谱柱内，导致下次使用难以冲出，色谱柱柱压偏高，基线不稳，出现大量鬼峰。4、走基线时，应将进样阀处于Load状态，用注射器进样时应快速进样，进样后将进样阀立即扳回到Inject状态，此时液相系统开始进入采样状态。采样结束后，可在数据分析里面查看分析结果并可进行编辑，也可以在脱机状态下查看样品的分析结果并编辑。数据分析：色谱得到的原始数据为色谱图，我们需要对途中的色谱峰进行积分，获得峰面积，并根据实验需要，使用不同的方法进行定量计算，比如外标法，内标法，面积百分比法等。仪器还可以得到光谱或者质谱信息，我们可以通过色谱柱数据软件的对应功能得到光谱图及质谱图，获得定性信息。获得所需信息后，可以利用色谱软件将结果输出成不同格式的报告，或将处理好的结果导入其他软件（如统计分析）进行二次处理。
