双缩脲反应原理

双缩脲反应的方程式是什么？

改良的双缩脲法快速测定蛋白质含量

(一) 方法原理
蛋白质有两个以上的肽键, 因此有双缩脲反应。在碱性溶液中蛋白质与Cu++ 形成紫红色络合物, 其颜色深浅与蛋白质的浓度成正比, 而与蛋白质的分子量及基酸成分无关。显色反应受温度影响颇大, 在常温(20～25℃)下需1小时, 40℃需15分钟, 60℃需5分钟。
(二) 仪器、设备
1. 仪器 光电比色计；离心机(4000转/分)；分析天平(感量0.0001克或0.001克)；恒温振荡器或恒温水浴锅；离心管、刻度吸管。
2. 试剂 4%硫酸铜(CuSO4 ·5H2 O)溶液；2.5%酒石酸钾钠溶液；双缩脲试剂配制: 在500毫升容量瓶中, 依次加入4%CuSO4 ·5H2 O 30毫升和2.5%酒石酸钾钠100毫升, 再慢慢加入5mol/L KOH 30毫升, 最后用蒸馏水稀释至刻度。使用时,再将上述溶液与透明度良好的异丙醇混合。
(三) 测定步骤
1. 酪蛋白标准曲线制备: 称取国产酪蛋白质2克(磨细至80目)于0.15mol/L KOH溶液中, 加热溶解并定容至100毫升, 分别取此溶液0.2～0.9毫升8份, 加入10毫升双缩脲试剂, 在60℃的恒温水浴振荡器中振荡5分钟显色完全, 随后以4000转/分离心10分钟,取离心液在波长550nm下, 以1cm比色杯进行比色测定, 空白为不加酪蛋白的试剂。同时取此溶液5毫升(双样)进行凯氏定氮, 乘以换算系数6.41即为酪蛋白含量。根据测得的光密度值与相应酪蛋白含量进行回归, 算出回归方程式Y=a+bX(X为酪蛋白光密度,Y为相应酪蛋白含量克)。
2. 样品处理与测定: 样品粉碎磨细通过40目筛孔, 以风干重样品或烘干重样品测定蛋白质含量。在分析天平上准确称取待测样品0.1000克, 放入干燥的25毫升凯氏消化瓶或大试管中, 内放几粒玻璃珠, 加入10毫升双缩脲试剂, 在60℃的恒温水浴振荡器上振荡5分钟, 随后以4000转/分离心10分钟, 取离心液在波长550nm下,以1cm比色杯进行比色测定, 空白为不加样品的试剂溶液。
(四) 结果计算
将样品测得的光密度值代入酪蛋白回归方程Y=a+bX(其中X表示样品光密度值,Y代表样品蛋白质含量克)。再乘以释倍数1000,即为100克样品中蛋白质含量(克)。
附注:
(1) 对含脂肪高的样品溶液与双缩脲试剂混合后, 若有雾状沉淀,需让其静置二小时以上, 再离心, 取其清液比色。
(2) 异丙醇可降低淀粉的溶解性,有利于蛋白质提取及显色。

http://biology.guangztr.edu.cn/jiaoxue/doc/gaoer/2.htm

1.双缩脲反应、节三酮反应、黄色反应、考马斯亮蓝反应的基本原理是什么?每一

双缩脲反应、茚三酮反应、考马斯亮蓝反应都是与蛋白质有关的颜色反应，以下是这些反应的基本原理：
双缩脲反应：蛋白质或含有两个或两个以上肽键的多肽中的肽键在碱性条件下与铜离子发生络合反应，生成了紫色络合物。
茚三酮反应：蛋白质或氨基酸的游离氨基与茚三酮在弱酸条件下发生反应，生成蓝紫色化合物，但脯氨酸与茚三酮反应则是生成黄色化合物。
黄色反应：含有苯环的蛋白质可以与浓硝酸发生显色反应，生成黄色化合物。
考马斯亮蓝反应：考马斯亮蓝在游离状态下呈红色，而与蛋白质通过疏水作用结合后呈蓝色。

双缩脲与蛋白质反应的原理是什么呢?

双缩脲就是缩二脲,就是两个尿素分子缩合,脱去一分子氨所形成的化合物,结构简式：
(也可写成“NH2CONHCONH2”),双缩脲可以和硫酸铜反应,生成紫色的物质,
可能是由于双缩脲分子中的肽键结构所引起的,肽键的氮原子会和Cu2+离子生成紫色络合物,因为蛋白质中也有肽键结构,所以也会发生此类反应,我们称这种含有肽键结构的化合物与硫酸铜溶液发生的显紫色的反应叫做“双缩脲反应”.
也就是说,分子中只要含有肽键,一般都会发生这种特征的紫色反应.
蛋白质中的肽键与铜离子络合的示意图：
不是双缩脲和蛋白质反应,而是蛋白质和铜离子的反应的类别,与双缩脲和铜离子的反应类别相同,都是“双缩脲反应”,生物试验也没给咱讲清楚,他说的双缩脲试剂中根本就没有双缩脲,而是0.1g/mL的氢氧化钠(双缩脲试剂A)和0.01g/mL的硫酸铜(双缩脲试剂B),在使用时是先向蛋白质溶液中加入A,震荡摇匀后,加入B.
至于氢氧化钠是强碱、硫酸铜是重金属盐,都可使蛋白质变性,这个问题应该不影响紫色反应,蛋白质变性的本质是空间结构遭到破坏,使其沉淀,失去生理活性,但是肽键结构、肽链的氨基酸顺序一般不被破坏.
强酸或强碱破坏蛋白zhi的一级结构,应该是因为多肽在强酸或强碱的作用下可以发生水解,但是不会说完全都水解掉了(常温下速率也不会很快),特别是在酸的催化下,水解是可逆的.事实就是产生了紫色反应,该反应确实发生了,我们不能否认事实啊.但也不能否认氨基酸也可以和铜离子络合,但生成的络合物不一定是紫色络合物,要么书上怎么说双缩脲反应是特征反应呢?

蛋白质与双缩脲试剂反应原理

蛋白质与双缩脲试剂反应原理介绍如下：由于蛋白质分子中含有许多与双缩脲结构相似的肽键，在碱性溶液中，双缩脲试剂能与蛋白质反应，形成紫色络合物．因此蛋白质的检测作用的实验原理是：双缩脲试剂与蛋白质呈现紫色反应。用来检测双缩脲，由于蛋白质分子中含有很多与双缩脲结构相似的肽键，因此也能与铜离子在碱性溶液中发生双缩脲反应。当底物中含有肽键时，试液中的铜与多肽配位，络合物呈紫色。可通过比色法分析浓度，在紫外可见光谱中的波长为540nm。鉴定反应的灵敏度为5-160mg/mL。双缩脲试剂检测蛋白质评价：优点：双缩脲法测定蛋白质的测定范围是1~10mg蛋白质，操作简单、快捷。既适合手工操作，又适合自动化分析，重复性好、线性关系好， 双缩脲试剂可以长期保存（ 若贮存瓶中有黑色沉淀出现，则需要重新配制）。缺点：灵敏度差，测定范围窄，样品需要量大，不同的蛋白质产生颜色的深浅相近，因此它常用于需要快速，但并不需要十分精确的蛋白质测定。干扰测定的物质包括有在性质上是氨基酸或肽的缓冲液，如TrIs缓冲液，因为它们产生阳性呈色反应，铜离子也容易被还原，有时出现红色沉淀。