胶原酶溶盘术的优势有哪些?
胶原酶溶盘术主要优点：据中山骨科专家介绍与开放性手术相比，胶原酶溶盘术具有以下优点：
(1)治疗彻底：胶原酶具有特异溶解性，可以溶解突出的椎间盘组织，解除对神经根的压迫，消除引起疼痛的炎症。
(2)安全性高：在X线透视或CT监控下，由专家操作可以避开神经、血管等重要结构，准确进入注射部位。
(3)不易复发：突出髓核被溶解、吸收，术后注意休息和康复锻炼，不易复发。
(4)损伤小：手术创口仅有针眼大小，可以很快愈合。不损伤骨质和韧带，保持了人体的原有结构，可以保持脊椎稳定。
(5)痛苦小：局麻下操作，几乎没有痛苦。
(6)疗效好：在接受治疗的病人中，术后当天痊愈占60%， 术后一周痊愈占20%，术后一月痊愈占10%，与开放手术效果相当。
(7)安全性高：克服了开放手术后引起的脊柱不稳定、神经根损伤，截瘫等并发症的发生。
胰蛋白酶和胶原蛋白酶在使细胞分离时有什么不同
胰蛋白酶（简称胰酶）是广泛应用的消化剂。胰蛋白酶是一种胰脏制品，对蛋白质有水介作用，主要作用于赖氨酸或精氨酸相连接的肽键，使细胞间质中的蛋白质水介而使细胞分散开，在常用的蛋白酶中由于产品的活力和纯度不同，对细胞的消化能力也不同，胰蛋白酶对细胞的作用，取决于细胞类型、酶的活力、配制的浓度、消化的温度、无机盐离子、pH以及消化时间的长短等。胶原酶是一种从细菌中提取出来的酶，对胶原有很强的消化作用。适于消化纤维性组织、上皮组织以及癌组织，它对细胞间质有较好的消化作用，对细胞本身影响不大，可使细胞与胶原成分脱离而不受伤害。该酶分离效果好，即使有钙、镁离子存在仍有活性，故可用PBS和含血清的培养液配制，即操作简便又可提高细胞成活率，最终浓度200u/mL或0.1~0.3mg/mL。此酶消化作用缓和，无需机械振荡，但胶原酶价格较高，大量使用将增加实验成本。
小鼠棕色脂肪前体细胞原代培养，怎样分离前体细胞
（转载，仅供参考）(1)取BAT cell 的Isolationbuffer按1：1000向其中加入p/s，4°C保存。Notice:用前按1~2mg/ml比例向Isolationbuffer中加入collagenase(c5138)，用滤器过滤消化液，并置于37°Cwater bath预热。(2) Steps:先热上medium(培养用,分离用,消化用)1）将新生Mice泡入70%EtoH 中约5mins进行消毒；(出生后两天内)2）剪开其肩部中间的外皮，两个镊子拨开皮肤,弯头镊子夹取其BAT（位于肩胛骨间的蝴蝶状组织，尽量勿取到其他多余组织）移入含PBS的60-mmdishes中；3）用PBS洗2~3遍；4）将BAT组织挑出来,在不含液体的情况下剪碎为1mm2的小块细碎的组织装进3ml含collagenase的Isolation buffer中；37°Cwater bath中消化30mins5）30min后将消化液用力甩，以使附着的cell散落；液体越浑浊说明震荡下来的细胞越多。6）用筛网将消化液过滤至15ml 离心管中，离心：200g，5min，弃上清；7）用Isolationbuffer（不含collagenase）吹起离心管底沉淀，混匀，离心：200g，5min，弃上清；8）用5ml 20%FBS-DMEM medium重悬cell，接于60-mmdishes中，培养，次日先用培养液清洗下再换液；取过很多次了，只要小鼠是出生2天内的就不会有问题的~！
pronase E和pronase是不是一种酶
肝星状细胞的培养，原代分离方法,仅供参考.
1.1动物准备 雄性SD大鼠，体重500g左右，常规饲料喂养，正常饮水。在分离HSCs前2周每天VitaminA
200IU/100g体重胃管内注入。
1.2. 主要试剂与仪器
1.2.1试剂：Collagenase
IV、PronaseE、鼠型VEGF、DNaseI，RPMI1640培养基、胎牛血清、马血清、Percoll。
1.3肝星状细胞的分离与纯化
分离当日氯胺酮0.2ml/100g体重、肝素150IU肌肉注射麻醉后，严格消毒。置于无菌超净台，仰卧位固定。开腹后门静脉插管灌注。具体操作如下：取大十字切口，上至剑突，下至耻骨联合，左右至两侧腋中线。皮瓣外翻，显露腹腔所有脏器。将小肠翻至鼠体左侧，可见肝门处门静脉由脾静脉和肠系膜静脉汇合而成。在双肾静脉上方游离肝下下腔静脉。肝上游离肝膈面，下压肝脏剪断镰状韧带至肝上下腔静脉。将9号输液针插入门静脉，动脉夹固定，转动灌流泵。同时迅速钳夹肝上下腔静脉，剪开事先游离好的肾静脉上肝下下腔静脉，整个原位灌流过程开始。
首先使用加葡萄糖1.0g/L、肝素5000IU/L的D-Hank’s液200ml，水浴加热至39℃，流速为20ml/min。尽量将肝脏内淤积的红细胞冲出。然后使用酶灌注液，0.05mmol／LCa2＋、0.05%CollagenaseIV、0.08％PronaseE、4.8g／L
HEPES（pH7.4－7.6）、5％FCS-HI的D-Hank’s液100ml，流速为5ml／min，消化肝脏。20分钟后使用无菌剪刀将肝组织剪下放入洁净的培养皿中，进入细胞室进行以下操作。在培养皿中去除肝包膜和Glisson鞘。将肝脏粉碎成糊状，放入0.05％CollagenaseIV、0.001％DNaseI和5.3%FCS-HI(V/V)的PBS中，37℃水浴摇动30分钟，使肝组织充分得到消化。将消化好的肝组织过100目钢丝筛，未能通过的肝组织用玻璃注射器针芯研磨，RPMI1640培养液冲洗。滤过的肝组织放入50mlFalcon离心管中，加RPMI1640培养液至50ml，20℃100x
g离心5分钟，去除大部分肝实质细胞。上清转入另一Falcon管中350x g离心10分钟。取沉淀重悬于50mlRPMI1640培养液中，再次350x
g离心10分钟。沉淀重悬于16ml的PBS中，分两份分别加入已经铺好梯度的Percoll的顶层。Percoll的密度梯度分为3层：由上至下依次为20％（密度~1.012
g/ml）20ml、35％（密度~1.014 g/ml）15ml、50％（密度~1.018g/ml）10ml。铺好后4℃900x
g离心30分钟。轻轻取出，不要摇动液面，可见在20％Percoll层中间有一混浊带。用16号针头插入液面下此处抽吸约10ml。加RPMI1640培养液至50ml，900x
g离心10分钟，沉淀重悬于10ml左右RPMI1640＋199混合培养液中，内加入10％胎牛血清和10％马血清以及10ng／ml的VEGF等。计数细胞产量并且行台盼蓝拒染试验，判断活力。
1.4
细胞培养
重悬细胞计数后按1.5x106／孔接种于铺被胶原S的24孔板。10分钟后重吸细胞混悬液入新孔。3天后首次换液，以后视情况每2－3天换液一次。如需作免疫组化等分析，可将细胞接种于内有玻片的6孔板中。细胞融合达到80％－90％左右可进行传代。传代时常规使用0.125％胰酶。
1.5细胞鉴定
细胞纯度鉴定在3天后细胞显现梭形形态时，使用高倍镜每孔随机选择10个视野，每个视野至少计数200个细胞。325nm波长紫外光激发细胞自发荧光。光镜、透射电子显微镜观察细胞形态。免疫组织化学方法鉴定原代HSCs和传代HSCs
Desmin、α-SMA的表达情况。
