评价免疫诊断试剂盒的标准有哪些
1.灵敏度 诊断试剂的灵敏度有两个不同的含义:首先,灵敏度代表该试剂具有检测出最低量被检物质的能力;其次,灵敏度还表示该试剂对人群或大 量样品中阳性检出能力,即有多少假阴性的程度．灵敏度是诊断试剂的首要质量标准，如果试剂的灵敏度达不到标准，那么这种试剂就无 价值。2.特异性 是指试剂正确检定不存在的被检物质的能力(即无假阴性)。一般而言，诊断试剂的特异性越强，则其质量越好。常规免疫诊断试剂的特 异性一方面取决于抗原的纯度及其特异性，另一方面取决于抗体的特异性。3.精密性 是指对同一样本重复测定时，每次测定结果与平均值接近程度，即重复测定值之间的符合程度。无论是用于定性或是定量的诊断试剂， 其精密度也是非常重要的，一般情况下，试剂的批内 C.V.(变异系数)值应小于 15％。4. 稳定性 通常指试剂在规定条件下能储存的时间。试剂的稳定性越好，他们的有效期越长，在失效期前，其灵敏度和特异性不应有任何改变。5.简便性 任何一个先进检验试剂应是操作简便，在不能减低试剂灵敏度和特异性等指标的情况下，实验和测定步骤越少越好，结果计算亦应简易； 在定性测定时，判断阴阳结果亦应简单明确。6.安全性 诊断试剂是用来诊断患者或被检人员是否含有某种传染因子或机体某种功能是否正常，故试剂本身需要安全无传染性。为保证工作人员 免受阳性物质感染，所有含传染因子的材料需经灭活处理，方可使用。为保证工作人员操作时免受损伤，试剂盒各组分的容器应避免使 用玻璃材料，尽量使用塑料制品，亦避免使用金属铝盖，改用塑料材料。在化学试剂组分中，避免使用强酸，强碱试剂。7.经济性 研制诊断试剂的目的是用于临床辅助诊断,其生产成本不能太高,市场价格亦应合理。
关于免疫磁珠细胞分选，有正选试剂盒和负选试剂盒，什么意思啊
拿T细胞的正选试剂盒来说吧，磁珠上貌似带亲和素，PBMC与CD3抗体孵育后过柱子，因CD3抗体上还有biotin，因此CD3+的T细胞就被吸附在柱子上，最后洗脱柱子你就得到比较纯的T细胞了。
而负选试剂盒来分选T细胞就会很复杂，也很贵。因为PBMC与一个cocktail的抗体组合孵育（有CD14、CD19、CD20等），过柱后T细胞将被柱子下的管子收集，纯度也不错。
除了价格差别外，负选试剂盒得到细胞表面不结合抗体，比如阳选的T细胞上结合anti-CD3，可能会激活T细胞，
免疫组化试剂盒与免疫组化抗体有什么区别?
是研究生做课题吗？
免疫组化试剂盒一般包括：1、特异性的一抗 2、免疫组化检测系统。但有的同时还具备3、显色系统。不同的公司内容有差别。所以你购买时一定了解清楚：1、一抗是做人的还是兔、鼠的组织，是否适合你需要？2、检测系统是ABC?SP?非生物素？其他？3、试剂盒的内容都有什么？有没有显色系统？4、如果没有，自己根据前面的检测系统需配那个显色系统？（其他的辅助试剂如PBS缓冲液、抗原修复液等一般另卖或自配）
免疫组化抗体即指特异性一抗，是你想用来标记的指标，免疫组化过程的其他试剂一律另外配备。
另外：根据经验，现在公司太多，网上的，上门推销的等等，质量良莠不齐。试剂很贵，学生经费有限，订货时谨慎。做实验时，如遇出结果困难，记得做阳性片对照，要敢于怀疑检测系统或显色系统的问题。当然，对于学生的操作水平我也不敢恭维，最好到病理科好好向老师多请教才是。
什么是免疫组化试剂盒?
免疫组化试剂盒用于体外诊断。Histostain®-Plus试剂盒用于检测与人体组织或细胞标本。免疫组化试剂盒适用范围为冰冻切片和石蜡包埋组织切片，新准备好的淋巴细胞，和固定的培养细胞。在1987年
Zymed
公司引入Histostain®-SP
检测试剂盒。LAB-SA
(也叫做链亲和素-生物素放大体系)被公认为是免疫组化最好的监测方法。LAB-SA的方法学已经在基础研究和平常的试验中广泛应用。
免疫组化试剂盒6大特点
1.简易:以简单的一步反应取代常规法的五个步骤。
2.快捷:以1个小时取代常规法的3-5
个小时。
3.通用:适合于绝大多数一级抗体,而且不需要二级抗体反应。
4.灵敏:具有与常规法相似的灵敏度。
5.重现性好:实验结果重现性好。
6.经济:抗体和试剂可重复使用
4-5次。
免疫组化试剂盒与免疫组化抗体有什么区别?
elisa试剂盒抗体一般不能用于免疫组化。
一、免疫组化试剂盒一般包括：
1、特异性的一抗
2、免疫组化检测系统。
3、有的同时还具备显色系统。
二、不同的公司内容有差别，所以购买时一定了解清楚：
1、一抗是做人的还是兔、鼠的组织；
2、检测系统是abc/sp/非生物素/其他；
3、试剂盒的内容都有什么？有没有显色系统？
4、如果没有，自己根据前面的检测系统需配哪个显色系统。（其他的辅助试剂如pbs缓冲液、抗原修复液等一般另卖或自配）
三、免疫组化抗体即指特异性一抗，是用来标记的指标，免疫组化过程的其他试剂一律另外配备。
另外：做实验时，如遇出结果困难，记得做阳性片对照，敢于怀疑检测系统或显色系统的问题。
什么是酶联免疫试剂盒？
酶联免疫试剂盒
ELISA（酶联免疫吸附试验，酶联免疫试剂盒） (以下简称ELISA（酶联免疫吸附试验，酶联免疫试剂盒）) ：是酶免疫测定技术中应用最广的技术。其基本方法是将已知的抗原或抗体吸附在固相载体 ( 聚苯乙烯微量反应板 ) 表面，使酶标记的抗原抗体反应在固相表面进行，用洗涤法将液相中的游离成分洗除。常用的 ELISA(酶联免疫吸附试验）法有双抗体夹心法和间接法，前者用于检测大分子抗原，后者用于测定特异抗体。
酶联免疫试剂盒工作原理
促卵泡素（FSH）是动物脑垂体分泌作用于卵巢卵泡生长、发育、分化、成熟和排卵的重要繁殖激素.由于是生物大分子,不能透过细胞膜,FSH必须与靶细胞
膜上的促卵泡素受体（FSHR）结合,经过受体介导将信息传递到靶细胞内,才能发挥其生物学功能.所提供的ELISA
Kit是典型的夹心法酶联免疫吸附测定试剂盒（ELISA）。预先包被的抗体为多克隆抗体。检测相抗体也为多克隆抗体，经生物素（biotin）标记。样
品和生物素标记抗体先后加入酶标板孔反应后，PBS或TBS洗涤。随后加入过氧化物酶标记的亲和素反应；经过PBS或TBS的彻底洗涤后用底物TMB显
色。TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的待测因子呈正相关。
酶联免疫试剂盒工作环境
1． 37℃恒温箱。
2． 标准规格酶标仪。
3． 自动洗板机。
4． 单通道或多通道可调节移液器以及其吸头。
5． 蒸馏水，容量瓶等
6． 干净的试管和Eppendof管
酶联免疫试剂盒操作步骤
1． 确定本次检测所需的已包被抗体的酶标板孔数目。
2． 将倍比稀释的标准品各0.1ml依次加入一排7孔中，1孔只加样品稀释液的作为对照。处理后的标本按100ul每孔加入。
3． 酶标板加上盖，37℃反应90分钟。
4． 反应后用自动洗板机吸去酶标板内的液体；或甩去酶标板内液体，再对着吸水纸拍几下。洗涤2次。
5． 将准备好的生物素抗体工作液按每孔0.1ml依次加入。37℃反应60分钟。
6． 0.01M TBS或0.01M PBS洗涤3次，每次浸泡1分钟左右。
7． 将准备好的ABC工作液按每孔0.1ml依次加入。37℃反应30分钟。
8． 0.01M TBS或0.01M PBS洗涤5次，每次浸泡1-2分钟左右。
9． 按每孔0.1ml依次加入TMB显色工作液，37℃避光反应，反应过程中，要经常的观察，当肉眼可见标准品的前3-4孔有 明显的梯度蓝色，后3-4孔差别不明显时，即可加入TMB终止液0.1ml/孔。（显色反应最长不要超过30分钟）。
10． 用酶标仪在450nm测定O.D.值。
11． 根据样品的吸光值在坐标上找出对应的浓度。用户也可以使用各种应用软件来计算。应记住由于样品稀释了N倍，其实际浓度应该×N。
酶联免疫试剂盒
酶联免疫试剂盒是基于经典酶联夹心技术原理，能测量人促卵泡素（FSH），只能用于研究用途，不得用于医学诊断。
酶联免疫试剂盒工作原理
促卵泡素（FSH）是动物脑垂体分泌作用于卵巢卵泡生长、发育、分化、成熟和排卵的重要繁殖激素.由于是生物大分子,不能透过细胞膜,FSH必须与靶细胞膜上的促卵泡素受体（FSHR）结合,经过受体介导将信息传递到靶细胞内,才能发挥其生物学功能.所提供的ELISA
Kit是典型的夹心法酶联免疫吸附测定试剂盒（ELISA）。预先包被的抗体为多克隆抗体。检测相抗体也为多克隆抗体，经生物素（biotin）标记。样品和生物素标记抗体先后加入酶标板孔反应后，PBS或TBS洗涤。随后加入过氧化物酶标记的亲和素反应；经过PBS或TBS的彻底洗涤后用底物TMB显色。TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的待测因子呈正相关。
酶联免疫试剂盒工作环境
1．
37℃恒温箱。
2．
标准规格酶标仪。
3．
自动洗板机。
4．
单通道或多通道可调节移液器以及其吸头。
5．
蒸馏水，容量瓶等
6．
干净的试管和Eppendof管
酶联免疫试剂盒操作步骤
1．
确定本次检测所需的已包被抗体的酶标板孔数目。
2．
将倍比稀释的标准品各0.1ml依次加入一排7孔中，1孔只加样品稀释液的作为对照。处理后的标本按100ul每孔加入。
3．
酶标板加上盖，37℃反应90分钟。
4．
反应后用自动洗板机吸去酶标板内的液体；或甩去酶标板内液体，再对着吸水纸拍几下。洗涤2次。
5．
将准备好的生物素抗体工作液按每孔0.1ml依次加入。37℃反应60分钟。
6．
0.01M
TBS或0.01M
PBS洗涤3次，每次浸泡1分钟左右。
7．
将准备好的ABC工作液按每孔0.1ml依次加入。37℃反应30分钟。
8．
0.01M
TBS或0.01M
PBS洗涤5次，每次浸泡1-2分钟左右。
9．
按每孔0.1ml依次加入TMB显色工作液，37℃避光反应，反应过程中，要经常的观察，当肉眼可见标准品的前3-4孔有
明显的梯度蓝色，后3-4孔差别不明显时，即可加入TMB终止液0.1ml/孔。（显色反应最长不要超过30分钟）。
10．
用酶标仪在450nm测定O.D.值。
11．
根据样品的吸光值在坐标上找出对应的浓度。用户也可以使用各种应用软件来计算。应记住由于样品稀释了N倍，其实际浓度应该×N。
参考资料：
http://www.shjmsw.com/weikang-Article-14759/
Western免疫印迹的分类
western显色的方法主要有以下几种：i.放射自显影ii.底物化学发光ECLiii.底物荧光ECFiv.底物DAB呈色现常用的有底物化学发光ECL和底物DAB呈色，体同水平和实验条件的是用第一种方法，目前发表文章通常是用底物化学发光ECL。只要买现成的试剂盒就行，操作也比较简单，原理如下（二抗用HRP标记）：反应底物为过氧化物+鲁米诺，如遇到HRP，即发光，可使胶片曝光，就可洗出条带。
western印迹的试剂
1、丙烯酰胺和N，N’-亚甲双丙烯酰胺，应以温热(以利于溶解双丙稀酰胺)的去离子水配制含有29%(w/v)丙稀酰胺和1%(w/v)N，N’-亚甲双丙烯酰胺储存液丙稀酰胺29g，N，N-亚甲叉双丙稀酰胺1g，加H2O至100ml。)储于棕色瓶，4℃避光保存。严格核实PH不得超过7.0，因可以发生脱氨基反应是光催化或碱催化的。使用期不得超过两个月，隔几个月须重新配制。如有沉淀，可以过滤。2、十二烷基硫酸钠SDS溶液:10%(w/v)0.1gSDS，1mlH2O去离子水配制，室温保存。3、分离胶缓冲液:1.5mmol/LTris-HCL(pH8.8):18.15gTris和48ml1mol/LHCL混合，加水稀释到100ml终体积。过滤后40C保存。4、浓缩胶缓冲液:0.5mmol/LTris-HCL(pH6.8):6.05gTris溶于40mlH2O中，用约48ml1mol/LHCL调至pH6.8加水稀释到100ml终体积。过滤后40C保存。这两种缓冲液必须使用Tris碱制备，再用HCL调节PH值，而不用Tris-CL。5、TEMED原溶液N，N，N’N’四甲基乙二胺催化过硫酸铵形成自由基而加速两种丙稀酰胺的聚合。PH太低时，聚合反应受到抑制。10%(w/v)过硫酸胺溶液。提供两种丙稀酰胺聚合所必须的自由基。去离子水配制数ml，临用前配制.6、SDS-PAGE加样缓冲液:pH6.80.5mol/LTris缓冲液8ml，甘油6.4ml，10%SDS12.8ml，巯基乙醇3.2ml，0.05%溴酚蓝1.6ml，H2O32ml混匀备用。按1:1或1:2比例与蛋白质样品混合，在沸水终煮3min混匀后再上样，一般为20-25ul，总蛋白量100μg。7、Tris-甘氨酸电泳缓冲液:30.3gTris，188g甘氨酸，10gSDS，用蒸馏水溶解至1000ml，得0.25mol/LTris-1.92mol/L甘氨酸电极缓冲液。临用前稀释10倍。8、转移缓冲液：配制1L转移缓冲液，需称取2.9g甘氨酸、5.8gTris碱、0.37gSDS，并加入200ml甲醇，加水至总量1L。9、丽春红染液储存液：丽春红S2g三氯乙酸30g磺基水杨酸30g加水至100ml用时上述储存液稀释10倍即成丽春红S使用液。使用后应予以废弃。10、脱脂奶粉5%(w/v)。11、NaN30.02%叠氮钠(有毒，戴手套操作)，溶于磷酸缓冲盐溶液(PBS)。12、Tris缓冲盐溶液(TBS):20mmol/LTris/HCL(pH7.5)，500mmol/LnaCl。13、Tween20(15)鼠抗人-MMP-9(16)鼠抗人-TIMP-1。14、过氧化物酶标记的第二抗体。15、NBT(溶于70%二甲基甲酰胺，75mg/ml)。16、BCIP(溶于100%二甲基甲酰胺，50mg/ml)。17、100mmol/LTris-HCL(pH9.5)。18、100mmol/LNaCl。19、50mmol/LTris-HCL(pH7.5)，5mmol/LEDTA。
