血红蛋白测定常用的方法按原理大致分为4类：全血铁法，比重法、折射仪法，血气分析法，比色法。
临床常用比色法，有HiCN测定法、十二烷基硫酸钠血红蛋白测定法、碱羟血红蛋白测定法、叠氮高铁血红蛋白测定法、溴代十六烷基三甲胺血红蛋白测定法等。
为统一Hb测定方法，1966年国际血液学标准化委员会（International Committee for Standardization in Haematology，ICSH）推荐HiCN测定法作为人血红蛋白测定的标准方法。1978年，国际临床化学联合会和国际病理学会在联合发布的国际性文件中重申了HiCN法。[1]
原理氰化高铁血红蛋白测定法
氰化高铁血红蛋白测定法原理
：血红蛋白（硫化血红蛋白除外）中的亚铁离子（Fe）被高铁氰化钾氧化为高铁离子（Fe），血红蛋白转化为高铁血红蛋白（hemiglobin, Hi）。Hi与氰化钾（KCN）中的氰离子反应生成HiCN。HiCN最大吸收波峰为540nm，波谷为504nm。在特定条件法，HiCN毫摩尔消光系数为44L/(mmol·cm)。HiCN在540nm处的吸光度与浓度成正比，根据测得的吸光度（A）可求得血红蛋白的浓度。[2]氰化高铁血红蛋白测定法
计算公式
：Hb（g/L）=(g/L)测定过程手工测定方法（仅作参考）：
器具和试剂采血工具，分光光度计，HiCN转化液。
步骤1.准备：打开分光光度计预热（预热时间由仪器类型决定），取5ml HiCN转化液与试管中；
2.采血：一般为采用皮肤采血法，采血20μl后立即溶于含有转化液的试管中，充分震荡混匀，静置5分钟；
3.测定：使用分光光度计测定混合液的吸光度A；
4.计算：根据公式计算血红蛋白含量。
参考范围成年：男性120—160g/L；女性110—150g/L
新生儿：170—200g/L
HiCN转化液转化液?
作用
评价
都氏①KFe(CN)和KCN：使Hb形成稳定的HiCN反应速度慢，15℃时40分钟才能使Hb完全转化成HiCN②NaHCO：防止高球蛋白血液标本的溶血液产生浑浊文-齐液①KFe(CN)和KCN：使Hb形成稳定的HiCNWHO和我国卫生部推荐使用②非离子型表面活性剂：溶解红细胞、游离Hb，防止溶血液浑浊；助溶剂③磷酸二氢钾：维持pH在7.2±0.2，防止高球蛋白血液标本浑浊临床意义增多与减少的临床意义基本与红细胞的增多与减少相同；由于贫血类型不同，有时也不一致，此时红细胞形态学改变有重要意义。由于本测定血红蛋白较精确，红细胞计算多有误差，故在贫血分度上多依据血红蛋白含量。
