质粒DNA提取时,菌体DNA要如何去除
①差速离心,可以将两种DNA分离
②凝胶电泳,分离开两种DNA后,将迁移最慢的条带(染色体DNA)剪下,用洗脱液洗脱下来.
③碱变性裂解法,细菌悬浮液在高碱性条件下,染色体和蛋白质变性,质粒DNA由于其超螺旋共价闭合结构,双链不会分离,再以PH4.8的高盐缓冲液调节其PH至中性,质粒DNA可再度复性,其速度比染色体DNA复性快,重新溶于溶液,而染色体DNA复性慢,并且易与变性的蛋白质纠缠沉淀,短时间内离心可分离到粗染色体DNA,而后除去蛋白质和RNA就可得到染色体DNA .
第几号元素?
第 01 号元素: 氢 [化学符号]H, 读“轻” 第 02 号元素:氦 [化学符号]He, 读“亥” 第 03 号元素: 锂 [化学符号]Li, 读“里” 第 04 号元素: 铍 [化学符号]Be, 读“皮”第 05 号元素: 硼 [化学符号]B, 读“朋”第 06 号元素: 碳 [化学符号]C, 读“炭” 第 07 号元素: 氮 [化学符号]N, 读“淡”第 08 号元素: 氧 [化学符号]O, 读“养” 第 09 号元素: 氟 [化学符号]F, 读“弗” 第 10 号元素: 氖 [化学符号]Ne, 读“乃”第 11 号元素:钠 [化学符号]Na, 读“纳”第 12 号元素: 镁 [化学符号]Mg, 读“美” 第 13 号元素: 铝 [化学符号]Al, 读“吕” 第 14 号元素: 硅 [化学符号]Si, 读“归” 第 15 号元素: 磷 [化学符号]P, 读“邻” 第 16 号元素: 硫 [化学符号]S, 读“流” 第 17 号元素: 氯 [化学符号]Cl, 读“绿” 第 18 号元素: 氩 [化学符号]Ar,A, 读“亚” 第 19 号元素: 钾 [化学符号]K, 读“甲” 第 20 号元素: 钙 [化学符号]Ca, 读“丐” 第 21 号元素: 钪 [化学符号]Sc, 读“亢” 第 22 号元素: 钛 [化学符号]Ti, 读“太” 第 23 号元素: 钒 [化学符号]V, 读“凡” 第 24 号元素: 铬 [化学符号]Cr, 读“各” 第 25 号元素: 锰 [化学符号]Mn, 读“猛”第 26 号元素: 铁 [化学符号]Fe, 读“铁” 第 27 号元素: 钴 [化学符号]Co, 读“古”第 28 号元素: 镍 [化学符号]Ni, 读“臬” 第 29 号元素: 铜 [化学符号]Cu, 读“同” 第 30 号元素: 锌 [化学符号]Zn, 读“辛” 第 31 号元素: 镓 [化学符号]Ga, 读“家” 第 32 号元素: 锗 [化学符号]Ge, 读“者” 第 33 号元素: 砷 [化学符号]As, 读“申” 第 34 号元素: 硒 [化学符号]Se, 读“西” 第 35 号元素: 溴 [化学符号]Br, 读“秀” 第 36 号元素: 氪 [化学符号]Kr, 读“克”
怎样提取微生物的质粒
碱提法:一、试剂准备1. 溶液Ⅰ: 50mM葡萄糖,25mM Tris-HCl(pH 8.0),10mM EDTA(pH 8.0)。1M Tris-HCl(pH 8.0)12.5ml,0.5M EDTA(pH 8.0)10ml,葡萄糖4.730g,加ddH2O至500ml。在10 lbf/in2高压灭菌15min ,贮存于4℃。2. 溶液Ⅱ:0.2N NaOH,1% SDS。2N NaOH 1ml,10%SDS 1ml,加ddH2O至10ml。使用前临时配置。3. 溶液Ⅲ:醋酸钾(KAc)缓冲液,pH 4.8。5M KAc 300ml,冰醋酸 57.5ml,加ddH2O至500ml。4℃保存备用。4. TE:10mM Tris-HCl(pH 8.0),1mM EDTA(pH 8.0)。1M Tris-HCl(pH 8.0)1ml,0.5M EDTA(pH 8.0)0.2ml,加ddH2O至100ml。15 lbf/in2高压湿热灭菌20min,4℃保存备用。5.苯酚/氯仿/异戊醇(25:24:1)6.乙醇(无水乙醇、70%乙醇)7. 5×TBE:Tris 碱54g,硼酸27.5g,EDTA-Na2·2H2O 4.65g,加ddH2O 至1000ml。15 lbf/in2高压湿热灭菌20min,4℃保存备用。8.溴化乙锭(EB):10mg/ml9.RNase A(RNA酶A):不含DNA酶(DNase-free) RNase A的10mg/ml,TE配制,沸水加热15min,分装后贮存于-20℃。10. 6×loading buffer(上样缓冲液):0.25%溴酚蓝,0.25%二甲苯青FF,40%(W/V)蔗糖水溶液。11. 1% 琼脂糖凝胶:称取1g琼脂糖于三角烧瓶中,加100ml 0.5×TBE,微波炉加热至完全溶化,冷却至60℃左右,加EB母液(10mg/ml)至终浓度0.5μg/ml(注意:EB为强诱变剂,操作时带手套),轻轻摇匀。缓缓倒入架有梳子的电泳胶板中,勿使有气泡,静置冷却30min以上,轻轻拔出梳子,放入电泳槽中(电泳缓冲液0.5×TBE),即可上样。二、操作步骤1. 挑取LB固体培养基上生长的单菌落,接种于2.0ml LB(含相应抗生素)液体培养基中