苯丙氨酸解氨酶
L-苯丙氨酸解氨酶L－phenylalanin ammo－nialyase缩写PAL。是催化直接脱掉L-苯丙氨酸上的氨而生成反式桂皮酸的酶。EC．4．3．1．5。是1961年J．Koukol，E．Conn在大麦中发现的。存在于高等植物、酵母、菌类的可溶性部分。推测分子量为30万。这是一个可把苯丙氨酸用于酚类化合物合成的酶。在很多情况下，其反应成为酚类化合物合成的有步骤的速率阶段。在组织中的活性可随外界因素而发生显著变化，用光照，病伤害，植物激素处理等会使活性显著增加。另外有时还受光敏色素所支配。在多数情况下，在组织中活性增加的同时，酶发生失活作用，这时组织中具有活性酶的量很快就会减少，据认为，这种失活是与类蛋白质物质作用有关。此外也已指出有非活性的酶的存在。[1]
活性测定
原理
苯丙氨酸解氨酶（phenylalanineammonialyase，PAL）催化苯丙氨酸的脱氨反应，使NH3释放出来形成反式肉桂酸。此酶的在植物体内次生物质（如木质素等）代谢中起重要作用。根据其产物，反式肉桂酸在290nm处吸光度的变化可以测定该酶的活性。材料、仪器设备及试剂
（一）材料：马铃薯块茎（二）仪器设备：1.?紫外分光光度计；2.?离心机；3.?研钵；4.?吸滤瓶；5.?红光装置；6.?打孔器。（三）试剂：1.?0.05mol/L?硼酸盐缓冲溶液（pH8.8）；2.?0.02mol/L?苯丙氨酸（用0.1mol/L?pH8.8硼酸缓冲液配制）；3.?5mmol/L?巯基乙醇硼酸缓冲液。实验步骤
1.?马铃薯圆片制备 将马铃薯块茎洗净、削皮，用打孔器（直径1.5cm）取圆柱，切除两头近表皮处，中间部分切成2mm厚的圆片。先用自来水漂洗，最后用蒸馏水洗一次，用纱布吸干表面的水。2.?光诱导 将圆片平铺在湿润滤纸的培养皿中，置20～30℃红光下处理24h以诱导PAL（也可接种病原菌诱导等）。3.?酶粗提液的制备 经诱导处理的马铃薯圆片5g，加10ml含5mmol/L?的巯基乙醇的硼酸缓冲液、0.5g聚乙烯吡咯烷酮（PVP）或PolyclarAT（除去酚类物质毒害，防止颜色的干扰、少量石英砂在研钵中研磨。匀浆抽气过滤，滤液10，000rpm离心15min，上清液为酶粗提液。上述操作均在0～4℃下进行。4.?活性测定与计算 1ml酶液加1ml0.02mol/L?苯丙氨酸，2ml蒸馏水，总体积为4ml。对照不加底物，多加1ml蒸馏水；反应液置恒温水浴30℃中保温，0.5h后用紫外分光光度计在290nm处测定吸光度。以每小时在290nm处吸光度变化0.01所需酶量为一单位（相当每毫升反应混合物形成1μg肉桂酸）。蛋白质含量用Folin－酚法进行测定。
