凝胶层析

凝胶过滤法原理

凝胶过滤法原理是不同的蛋白质分子对固定化在载体上的特殊配基具有不同的识别和结合能力。凝胶过滤法又称分子排阻法， 这是一种高效分离纯化蛋白质的方法。选择与待纯化蛋白质具有特殊识别和结合作用的配基，然后应用化学方法将该配基与载体共价链接。将这种有配基的载体装入层析柱中，当含有待纯化的蛋白质溶液通过层析柱时，该蛋白质即与配基发生特异性结合而被吸附在层析柱上，而其他蛋白质则流出柱外。被特异性结合在层析柱上的蛋白质，可以用适当的配体洗脱液洗脱。凝胶过滤层析又称为排阻层析或分子筛方法。其基本原理是利用被分离物质分子大小不同及固定相（凝胶）具有分子筛的特点，将被分离物质各成分按分子大小分开，达到分离的目的。层析柱中的填料是某些惰性的多孔网状结构物质，多是交联的聚糖(如葡聚糖或琼脂糖)类物质，小分子物质能进入其内部，流下时路程较长，而大分子物质却被排除在外部，下来的路程短，当一混合溶液通过凝胶过滤层析柱时，溶液中的物质就按不同分子量筛分开了。

凝胶过滤层析的原理是什么?

基本原理：凝胶过滤层析也称分子筛层析、排阻层析。是利用具有网状结构的凝胶的分子筛作用，根据被分离物质的分子大小不同来进行分离。层析柱中的填料是某些惰性的多孔网状结构物质，多是交联的聚糖（如葡聚糖或琼脂糖）类物质，小分子物质能进入其内部，流下时路程较长，而大分子物质却被排除在外部，下来的路程短，当一混合溶液通过凝胶过滤层析柱时，溶液中的物质就按不同分子量筛分开了。凝胶层析的特点：1）凝胶层析操作简便，所需设备简单。有时只要有一根层析柱便可进行工作。分离介质——凝胶完全不需要像离子交换剂那样复杂的再生过程便可重复使用。2）分离效果较好，重复性高。最突出的是样品回收率高，接近100%。3）分离条件缓和。凝胶骨架亲水，分离过程又不涉及化学键的变化，所以对分离物的活性没有不良影响。4）应用广泛。适用于各种生化物质，如肽类、激素、蛋白质、多糖、核酸的分离纯化、脱盐、浓缩以及分析测定等。分离的分子量范围也很宽，如Sephadex G类为102-105 D；Sepharose类为105-108 D。以上内容参考：百度百科-凝胶过滤层析

比较凝胶层与纸层析在实验原理上的区别

凝胶层析与纸层析区别为：载体不同、原理不同、预处理不同。一、载体不同1、凝胶层析：凝胶层析的载体为是由胶体溶液凝结而成的固体。2、纸层析：纸层析是用纸作为载体。二、原理不同1、凝胶层析：凝胶层析的原理为分子筛效应，在洗脱过程中，大分子不能进入凝胶内部而沿凝胶颗粒间的空隙最先流出柱外，而小分子可以进入凝胶颗粒内部的多孔网状结构，流速缓慢，以至最后流出柱外，从而使样品中分子大小不同的物质得到分离。2、纸层析：纸层析其应用的原理是相似相溶原理，是通过分裂系的在同一介质中分散速度不同来分析的。三、预处理不同1、凝胶层析：凝胶层析必须于使用前在过量的溶剂中充分地膨胀。2、纸层析：纸层析无需进行预处理。

凝胶层析有哪些应用？

(1）作为分析工具：分子量相差比较大的混合物可以用凝胶层析进行分析。在凝胶层析的基础上配合使用纸层析或薄层层析技术可以鉴别出各个析离成分。(2)作为脱盐工具：高分子(如蛋白质核酸、多糖等)溶液中的盐类杂质可以借助凝胶层析技术将其除去，这一操作称为脱盐，凝胶层析技术脱盐速度快而完全，而且蛋白质、酶类等成分在分离过程不易变性。葡聚糖凝胶SephadexG-25因流动阻力小交联度适宜，常用于蛋白质溶液的脱盐。(3)高分子溶液的浓缩：(4)用于去除热原物质：热原物质是微生物产生的某些使人发热的物质，如某些多糖蛋白质复合物等，用凝胶处理去离子水，可以得到适于制备注射剂的无热原质水。(5)用于测定高分子物质的分子量用一系列已知分子量的标准样品放入同一凝胶层析柱内，令其在同一条件下进行凝胶层析分离，记下每一种成分的洗脱体积，并以洗脱体积对分子量的对数作图，在一定分子量范围内，可得一直线这就是分子量的标准曲线。(6)用于物质的分离提纯