在进行动物细胞培养时,遗传物质的改变发生在原代培养的过程中。
A、欲获得人工种子，需培养至胚状体阶段，A错误；
B、在进行动物细胞培养时，遗传物质的改变发生在传代培养过程中，B错误；
C、植物细胞的全能性高于动物细胞，因此胡萝卜的韧皮部细胞的全能性比人的生发层细胞更容易表达出来，C正确；
D、脱分化过程中细胞以有丝分裂方式增殖，不会发生减数分裂，D错误．
故选：C．
以动物细胞悬浮培养为例详细说明动物细胞大规模培养的关键技术. 如题
悬浮培养方法：在悬浮培养前,对动物细胞的生长和生理特性进行充分的考察,是十分必要的,能为悬浮培养提供有益的参考.悬浮培养可以从两个方面入手,一是改变动物细胞的培养环境,实行阶段培养；二是进行代谢调控. （1）阶段培养 ：一般认为,动物细胞的培养条件应尽量模拟来源动物体内的条件,而且在培养中通常保持不变.而实际上,每种细胞的最适生长条件和最适产物生成条件是不同的.阶段法培养就是根据这一点,把培养过程分为细胞生长期和产物生成期,分别采取不同的培养条件,以达到在细胞生长期使接种细胞大量繁殖,提高比生长速率,尽快获得高密度细胞；在产物生成期保持细的高密度,维持存活率,降低细胞死亡速率,持续获得高产率蛋白的目的.当产物蛋白对细胞有抑制时,阶段培养尤见优势.具体说来,可以用以下方法： ①pH值阶段培养 对大多数动物细胞,培养液中合适的pH为7.2-7.4.低于6.8或高于7.6对细胞的生长都不利.近年来,对胞内pH的研究比较活跃.实验发现胞内pH对细胞的代谢影响很大,胞内pH 降低0.2个单位,就足以使磷酸果糖激酶失活,抑制糖酵解途径,使细胞的生长受阻；而胞内pH 升高0.2个单位,可以提高糖酵解速度50%.胞外pH 的降低和培养液中铵离子浓度的提高,都能引起胞浆酸化,胞内pH降低.有人把CO2的浓度由5%降为2.5%,胞内pH提高了0. 2个单位.胞内pH比胞外pH的检测麻烦,所以还没有广泛应用. ②溶氧阶段培养 不同细胞和同一细胞在不同生长时期对氧的需求均不相同.有人发现细胞生长的最适溶氧值为60%,但有人发现杂交瘤的最适溶氧为100%.一般说来,溶氧主要影响细胞的繁殖,而对产物的生成无直接影响,通过影响细胞生长间接起作用.通常在细胞生长初期控制溶氧的较低的水平,在对数生长期,当细胞达到较高的浓度时,提高溶氧水平；在产物生成期,应控制溶氧的适当水平.溶氧过高,细胞就会加速消耗营养物质,产生许多代谢产物.这些代谢产物对细胞有抑制作用,会大大降低细胞的存活率,降低产物的比生成速率.溶氧过低,细胞过氧的需求得不到满足,依然会降低产物蛋白的产物. ③化学试剂诱导阶段培养 如果构建的细胞上有可诱导基因,进入产物生成期后,就可以添加化学试剂对基因进行诱导,以实现目的基因的高表达,比如,将表达尿激酶原和二氢叶酸还原酶基因的两个转录单位置于同一载体,分别受金属硫（MT）和SV40早期启动子控制,具有用氨甲喋呤（MTX）使基因扩增和利用金属Zn2+诱导的双重功能,有利于尿激酶的高表达.细胞在细胞周期的不同时期,不仅蛋白的分泌速率不同,而且所分泌蛋白的类型和糖基化程度也可能不同.因此,研究并控制细胞的生理状态很重要.然而,在细胞培养中,细胞生理状态的检测很麻烦.有人发现,细胞大小随各时期变化很明显,因此可以作电子细胞计数器就行了.分段培养应结合具体的培养条件进行.有些细胞的最适生长温度和产物生成温度相同,就不能进行温度阶段培养,而应寻找别的差异条件.在细胞生长期有的细胞可能会因比生长速率过大而产生非生产性细胞,这时就应控制比生长速率在一个适当的范围.（2）代谢调控培养 乳酸和氨是在培养过程中动物细胞产生的主要代谢产物,对细胞的正常生理功能在抑制甚至毒害作用.在分批培养和补料分批培养中的这一问题尤为突出.尽管灌注培养可以通过提高灌注速度来去除抑制产物.但是,一方面由于灌注培养细胞浓度很高,提高灌注速率,营养成分的供给十分充分,氨和乳酸的产生速率也增加了.另一方面,过高的灌注速率提高了细胞的比生长速率,降低产物的比产率,加上细胞对营养的利用并不彻底,培养液中会残留大量的蛋白,造成提取纯化的不便和培养基的浪费.所以,在培养中调控动物细胞的代谢途径一直较受重视.通过代谢调控,可以减少副产物的产生,降低细胞的死亡速率,还可以控制灌注速率和培养液成分,控制细胞的状态和比生长速率,以提高目标蛋白的产率.具体有以下方法： ①控制葡萄糖浓度法 乳酸浓度升高,会导致比生长速率降低,比死亡速率升高.乳酸的降低可更换葡萄糖为己糖如果糖或半乳糖,还可限制葡萄糖减少乳酸的生成,使初始葡萄糖浓度较低,在培养过程中再添加.在控制葡萄糖浓度法培养中,生长期可以使葡萄糖浓度稍高,以促进细胞生长；在产物合成期降低葡萄糖的浓度,降低乳酸的产生速率,避免乳酸的积累,减少毒害,降低死亡速率,维护持活细胞数在较高水平.同时还可以降低比生长速率,增加目标蛋白的产生速率.灌注葡萄糖的同时,要间歇或连续地加入其他组分,以避免营养缺乏,其中谷氨酰胺要保持在较低水平,因为细胞的生长不依赖糖酵解,即使没有葡萄糖,细胞仍可以通过降解谷氨酰胺获得能量.假如谷氨酰胺的浓度过高,细胞就会偏向谷氨酰胺酵解,从而削弱这种方法的效果.由于葡萄糖的价格相对低廉,这种方法很有前途. ②控制谷氨酰胺法 上面提到,没有葡萄糖,细胞可以利用谷氨酰胺作能量物质.因此,控制谷氨酰胺比控制葡萄糖要容易些,应用这一方法的报道也较多.控制谷氨酰胺浓度的目的,主要是减少氨的产生.氨对细胞的毒性比乳酸大得多,表现为降低比生长速率,增加死亡速率.有人详细地研究了动物细胞的代谢过程,采用底物限制补料分批工艺对动物细胞进行代谢控制.他采用这一方法,使氨的浓度降低了一半.控制谷氨酰胺法与控制葡萄糖法一样,要维持葡萄糖在较低水平. ③控制葡萄糖和谷氨酰胺法 在细胞中,葡萄糖代谢和谷氨酰胺代谢密切相关.葡萄糖消耗上升,则谷氨酰胺消耗下降,反之亦然.在相当大的一个范围内,葡萄糖和谷氨酰胺的消耗速率与其浓度成正比.控制葡萄糖和谷氨酰胺法可降低乳酸和氨的产生,还能有效控制比生长速率.在细胞生长期,提供充分的营养,供细胞的需要；在产物合成期,降低葡萄糖和谷氨酰胺的浓度或流量,降低比生长速率,增加目标蛋白的产率. ④去除代谢产物法 通常使用透析膜,超滤腊或吸附剂选择性去除乳酸、氨或铵离子.有人建议加化学试剂比如钾盐来消除氨的影响 ,也有人建议可使用有谷氨酰胺合成酶的细胞. 3、灌注培养的缺点 灌注培养发展到现在,还有许多急待解决的问题.其最大的缺点是培养基的利用不充分,造成一定的浪费.随着细胞培养技术和产品分离技术的进一步发展,建立细胞培养与产物分离的耦合系统,能充分利用培养液,降低生产成本,一直是人们追求的目标,这里就不赘述.
原代培养的特点 原代培养的特点简述
1、原代培养是直接从生物体获取组织或器官的一部分进行培养，也称初代培养。
2、严格地说即从体内取出组织接种培养到第一次传代阶段，但实际上，通常把第一代至第十代以内的培养细胞统称为原代细胞培养。一般持续1一4周。此期细胞呈活跃的移动，可见细胞分裂，但不旺盛。
3、原代培养细胞与体内原组织在形态结构和功能活动上相似性大。由于培养的细胞刚刚从活体组织分离出来，故更接近于生物体内的生活状态。这一方法可为研究生物体细胞的生长、代谢、繁殖提供有力的手段。同时也为以后传代培养创造条件。
4、原代培养的过程指动物的组织或器官从机体取出后，经机械法或各种酶类（常用胰蛋白酶）和鳌合剂（常用EDTA)处理，使之分散成单个细胞，加入适量培养基，置于合适的培养容器中，在无菌、适当温度和一定条件下，使之生存、生长和繁殖的过程。
原代培养的特点 原代培养的特点简述
1、原代培养是直接从生物体获取组织或器官的一部分进行培养，也称初代培养。
2、严格地说即从体内取出组织接种培养到第一次传代阶段，但实际上，通常把第一代至第十代以内的培养细胞统称为原代细胞培养。一般持续1一4周。此期细胞呈活跃的移动，可见细胞分裂，但不旺盛。
3、原代培养细胞与体内原组织在形态结构和功能活动上相似性大。由于培养的细胞刚刚从活体组织分离出来，故更接近于生物体内的生活状态。这一方法可为研究生物体细胞的生长、代谢、繁殖提供有力的手段。同时也为以后传代培养创造条件。
4、原代培养的过程指动物的组织或器官从机体取出后，经机械法或各种酶类（常用胰蛋白酶）和鳌合剂（常用EDTA)处理，使之分散成单个细胞，加入适量培养基，置于合适的培养容器中，在无菌、适当温度和一定条件下，使之生存、生长和繁殖的过程。
原代细胞培养和传代培养的方法及其:细胞培养和传代
初代培养 原理
将动物机体的各种组织从机体中取出，经各种酶（常用胰蛋白酶）、螯合剂（常用EDTA）或机械方法处理，分散成单细胞，置合适的培养基中培养，使细胞得以生存、生长和繁殖，这一过程称原代培养。
仪器、材料及试剂
仪器：培养箱（调整至37℃），培养瓶、青霉素瓶、小玻璃漏斗、平皿、吸管、移液管、纱布、手术器械、血球计数板、离心机、水浴箱（37℃）
材料：动物组织块
试剂：1640培养基（含20%小牛血清），0.25%胰酶，Hank′s液，碘酒
初代消化培养法
1. 准备：取各种已消毒的培养用品置于净化台面，紫外线消毒20分钟。开始工作前先洗手、75%酒精擦拭手至肘部。
2. 布局：点燃酒精灯，安装吸管帽。
3. 处理组织：把组织块置于烧杯中，用Hanks液漂洗2~3次，去除血污；如怀疑组织可能污染，可先置于含有青链霉素的混合液中30~60分钟。
4. 剪切：用眼科剪把组织切成2~3毫米大小的块，以便于消化。加入比组织块总量多30~50倍的胰蛋白酶液，然后一并倒入三角烧瓶中，结扎瓶口或塞以胶塞。
5. 消化：或用恒温水浴，或置于37℃温箱消化均可，消化中每隔20分钟应摇动一次，如用电磁恒温搅拌器消化更好。消化时间依组织块的大小和组织的硬度而定。
6. 分离：在消化过程中见消化液发混浊时，可用吸管吸出少许消化液在镜下观察，如组织已分散成细胞团或单个细胞，立即终止消化，随即通过适宜不锈钢筛，滤掉尚未充分消化开的组织块。低速（500~1000转/分）离心消化液5分钟，吸出上清，加入适量含有血清的培养液。
7. 计数：用计数板计数，如细胞悬液细胞密度过大，再补加培养液调整后，分装入培养瓶中。对大多数细胞来说，pH要求在7.2~7.4范围，培养液呈微红色，如颜色偏黄，说明液体变酸，可用NaHCO3调整。
8. 培养：置于36.5℃温箱培养，如用CO2温箱培养，瓶口需用纱布棉塞或螺旋帽堵塞，纱布塞易生霉菌，每次换液时需要换新塞。
初代组织块培养法
1. 剪切：把组织小块置于小烧杯或青霉素小瓶中，用Hanks液漂洗二三次以去掉表面血污，吸静Hanks液，用眼科剪反复剪切1mm3块为止。
2. 摆布：用弯头吸管吸取若干小块，置于培养瓶中，用吸管弯头把组织小块摆布在培养瓶底部，小块相互距离以0.5cm为宜，每一25ml培养瓶底可摆布20~30块。
3. 轻轻翻转培养瓶，另瓶底向上，注意翻瓶时勿另组织小块流动，塞好瓶塞，置36.5℃温箱培养2小时左右（勿超过4小时），使小块微干涸。
4. 培养：从微箱中取出培养瓶，开塞，46度斜持培养瓶，箱瓶底脚部轻轻注入培养液少许，然后缓缓再把培养瓶翻转过来，让培养液慢慢覆盖附于瓶地上的组织小块。置温箱中静止培养。待细胞从组织块游出数量增多后。再补加培养液。
传代培养法
原理
细胞在培养瓶长成致密单层后，已基本上饱和，为使细胞能继续生长，同时
也将细胞数量扩大，就必须进行传代（再培养）。 传代培养也是一种将细胞种保存下去的方法。同时也是利用培养细胞进行各种实验的必经过程。悬浮型细胞直接分瓶就可以，而贴壁细胞需经消化后才能分瓶。
材料和试剂
1. 细胞：贴壁细胞株
2. 试剂：0.25％胰酶、1640培养基（含10％小牛血清）
3. 仪器和器材：倒置显微镜，培养箱、培养瓶、吸管、废液缸等
操作步骤
1. 吸除培养瓶内旧培养液。
2. 向瓶内加入胰蛋白酶和EDTA混合液少许，以能覆满瓶底为限。
3. 置温箱中2~5分钟，当发现细胞质回缩，细胞间隙增大后，立即终止消化。
4. 吸除消化液，向瓶内注入Hanks液数毫升，轻轻转动培养瓶，把残余消化液冲掉。注意加Hanks液冲洗细胞时，动作要轻，以免把已松动的细胞冲掉流失，如用胰蛋白酶液单独消化，吸除胰蛋白酶液后，可不用Hanks液冲洗，直接加入培养液。
5. 用吸管吸取营养液轻轻反复吹打瓶壁细胞，使之从瓶壁脱离形成细胞悬液。
6. 计数板计数后，把细胞悬液分成等份分装入数个培养瓶中，置温箱中培养。
无菌操作注意事项
1. 操作前要洗手，进入超净台后手要用75%酒精或0.2%新洁尔灭擦试。试剂等瓶口也要擦试。
2. 点燃酒精灯，操作在火焰附近进行，耐热物品要经常在火焰上烧灼，金属器械烧灼时间不能太长，以免退火，并冷却后才能夹取组织，吸取过营养液的用具不能再烧灼，以免烧焦形成碳膜。
3. 操作动作要准确敏捷，但又不能太快，以防空气流动，增加污染机会。
4. 不能用手触已消毒器皿的工作部分，工作台面上用品要布局合理。
5. 瓶子开口后要尽量保持45℃斜位。
6. 吸溶液的吸管等不能混用。
初代培养 原理
将动物机体的各种组织从机体中取出，经各种酶（常用胰蛋白酶）、螯合剂（常用EDTA）或机械方法处理，分散成单细胞，置合适的培养基中培养，使细胞得以生存、生长和繁殖，这一过程称原代培养。
仪器、材料及试剂
仪器：培养箱（调整至37℃），培养瓶、青霉素瓶、小玻璃漏斗、平皿、吸管、移液管、纱布、手术器械、血球计数板、离心机、水浴箱（37℃）
材料：动物组织块
试剂：1640培养基（含20%小牛血清），0.25%胰酶，Hank′s液，碘酒
初代消化培养法
1. 准备：取各种已消毒的培养用品置于净化台面，紫外线消毒20分钟。开始工作前先洗手、75%酒精擦拭手至肘部。
2. 布局：点燃酒精灯，安装吸管帽。
3. 处理组织：把组织块置于烧杯中，用Hanks液漂洗2~3次，去除血污；如怀疑组织可能污染，可先置于含有青链霉素的混合液中30~60分钟。
4. 剪切：用眼科剪把组织切成2~3毫米大小的块，以便于消化。加入比组织块总量多30~50倍的胰蛋白酶液，然后一并倒入三角烧瓶中，结扎瓶口或塞以胶塞。
5. 消化：或用恒温水浴，或置于37℃温箱消化均可，消化中每隔20分钟应摇动一次，如用电磁恒温搅拌器消化更好。消化时间依组织块的大小和组织的硬度而定。
6. 分离：在消化过程中见消化液发混浊时，可用吸管吸出少许消化液在镜下观察，如组织已分散成细胞团或单个细胞，立即终止消化，随即通过适宜不锈钢筛，滤掉尚未充分消化开的组织块。低速（500~1000转/分）离心消化液5分钟，吸出上清，加入适量含有血清的培养液。
7. 计数：用计数板计数，如细胞悬液细胞密度过大，再补加培养液调整后，分装入培养瓶中。对大多数细胞来说，pH要求在7.2~7.4范围，培养液呈微红色，如颜色偏黄，说明液体变酸，可用NaHCO3调整。
8. 培养：置于36.5℃温箱培养，如用CO2温箱培养，瓶口需用纱布棉塞或螺旋帽堵塞，纱布塞易生霉菌，每次换液时需要换新塞。
初代组织块培养法
1. 剪切：把组织小块置于小烧杯或青霉素小瓶中，用Hanks液漂洗二三次以去掉表面血污，吸静Hanks液，用眼科剪反复剪切1mm3块为止。
2. 摆布：用弯头吸管吸取若干小块，置于培养瓶中，用吸管弯头把组织小块摆布在培养瓶底部，小块相互距离以0.5cm为宜，每一25ml培养瓶底可摆布20~30块。
3. 轻轻翻转培养瓶，另瓶底向上，注意翻瓶时勿另组织小块流动，塞好瓶塞，置36.5℃温箱培养2小时左右（勿超过4小时），使小块微干涸。
4. 培养：从微箱中取出培养瓶，开塞，46度斜持培养瓶，箱瓶底脚部轻轻注入培养液少许，然后缓缓再把培养瓶翻转过来，让培养液慢慢覆盖附于瓶地上的组织小块。置温箱中静止培养。待细胞从组织块游出数量增多后。再补加培养液。
传代培养法
原理
细胞在培养瓶长成致密单层后，已基本上饱和，为使细胞能继续生长，同时
也将细胞数量扩大，就必须进行传代（再培养）。 传代培养也是一种将细胞种保存下去的方法。同时也是利用培养细胞进行各种实验的必经过程。悬浮型细胞直接分瓶就可以，而贴壁细胞需经消化后才能分瓶。
材料和试剂
1. 细胞：贴壁细胞株
2. 试剂：0.25％胰酶、1640培养基（含10％小牛血清）
3. 仪器和器材：倒置显微镜，培养箱、培养瓶、吸管、废液缸等
操作步骤
1. 吸除培养瓶内旧培养液。
2. 向瓶内加入胰蛋白酶和EDTA混合液少许，以能覆满瓶底为限。
3. 置温箱中2~5分钟，当发现细胞质回缩，细胞间隙增大后，立即终止消化。
4. 吸除消化液，向瓶内注入Hanks液数毫升，轻轻转动培养瓶，把残余消化液冲掉。注意加Hanks液冲洗细胞时，动作要轻，以免把已松动的细胞冲掉流失，如用胰蛋白酶液单独消化，吸除胰蛋白酶液后，可不用Hanks液冲洗，直接加入培养液。
5. 用吸管吸取营养液轻轻反复吹打瓶壁细胞，使之从瓶壁脱离形成细胞悬液。
6. 计数板计数后，把细胞悬液分成等份分装入数个培养瓶中，置温箱中培养。
无菌操作注意事项
1. 操作前要洗手，进入超净台后手要用75%酒精或0.2%新洁尔灭擦试。试剂等瓶口也要擦试。
2. 点燃酒精灯，操作在火焰附近进行，耐热物品要经常在火焰上烧灼，金属器械烧灼时间不能太长，以免退火，并冷却后才能夹取组织，吸取过营养液的用具不能再烧灼，以免烧焦形成碳膜。
3. 操作动作要准确敏捷，但又不能太快，以防空气流动，增加污染机会。
4. 不能用手触已消毒器皿的工作部分，工作台面上用品要布局合理。
5. 瓶子开口后要尽量保持45℃斜位。
6. 吸溶液的吸管等不能混用。
初代培养 原理
将动物机体的各种组织从机体中取出，经各种酶（常用胰蛋白酶）、螯合剂（常用EDTA）或机械方法处理，分散成单细胞，置合适的培养基中培养，使细胞得以生存、生长和繁殖，这一过程称原代培养。
仪器、材料及试剂
仪器：培养箱（调整至37℃），培养瓶、青霉素瓶、小玻璃漏斗、平皿、吸管、移液管、纱布、手术器械、血球计数板、离心机、水浴箱（37℃）
材料：动物组织块
试剂：1640培养基（含20%小牛血清），0.25%胰酶，Hank′s液，碘酒
初代消化培养法
1. 准备：取各种已消毒的培养用品置于净化台面，紫外线消毒20分钟。开始工作前先洗手、75%酒精擦拭手至肘部。
2. 布局：点燃酒精灯，安装吸管帽。
3. 处理组织：把组织块置于烧杯中，用Hanks液漂洗2~3次，去除血污；如怀疑组织可能污染，可先置于含有青链霉素的混合液中30~60分钟。
4. 剪切：用眼科剪把组织切成2~3毫米大小的块，以便于消化。加入比组织块总量多30~50倍的胰蛋白酶液，然后一并倒入三角烧瓶中，结扎瓶口或塞以胶塞。
5. 消化：或用恒温水浴，或置于37℃温箱消化均可，消化中每隔20分钟应摇动一次，如用电磁恒温搅拌器消化更好。消化时间依组织块的大小和组织的硬度而定。
6. 分离：在消化过程中见消化液发混浊时，可用吸管吸出少许消化液在镜下观察，如组织已分散成细胞团或单个细胞，立即终止消化，随即通过适宜不锈钢筛，滤掉尚未充分消化开的组织块。低速（500~1000转/分）离心消化液5分钟，吸出上清，加入适量含有血清的培养液。
7. 计数：用计数板计数，如细胞悬液细胞密度过大，再补加培养液调整后，分装入培养瓶中。对大多数细胞来说，pH要求在7.2~7.4范围，培养液呈微红色，如颜色偏黄，说明液体变酸，可用NaHCO3调整。
8. 培养：置于36.5℃温箱培养，如用CO2温箱培养，瓶口需用纱布棉塞或螺旋帽堵塞，纱布塞易生霉菌，每次换液时需要换新塞。
初代组织块培养法
1. 剪切：把组织小块置于小烧杯或青霉素小瓶中，用Hanks液漂洗二三次以去掉表面血污，吸静Hanks液，用眼科剪反复剪切1mm3块为止。
2. 摆布：用弯头吸管吸取若干小块，置于培养瓶中，用吸管弯头把组织小块摆布在培养瓶底部，小块相互距离以0.5cm为宜，每一25ml培养瓶底可摆布20~30块。
3. 轻轻翻转培养瓶，另瓶底向上，注意翻瓶时勿另组织小块流动，塞好瓶塞，置36.5℃温箱培养2小时左右（勿超过4小时），使小块微干涸。
4. 培养：从微箱中取出培养瓶，开塞，46度斜持培养瓶，箱瓶底脚部轻轻注入培养液少许，然后缓缓再把培养瓶翻转过来，让培养液慢慢覆盖附于瓶地上的组织小块。置温箱中静止培养。待细胞从组织块游出数量增多后。再补加培养液。
传代培养法
原理
细胞在培养瓶长成致密单层后，已基本上饱和，为使细胞能继续生长，同时
也将细胞数量扩大，就必须进行传代（再培养）。 传代培养也是一种将细胞种保存下去的方法。同时也是利用培养细胞进行各种实验的必经过程。悬浮型细胞直接分瓶就可以，而贴壁细胞需经消化后才能分瓶。
材料和试剂
1. 细胞：贴壁细胞株
2. 试剂：0.25％胰酶、1640培养基（含10％小牛血清）
3. 仪器和器材：倒置显微镜，培养箱、培养瓶、吸管、废液缸等
操作步骤
1. 吸除培养瓶内旧培养液。
2. 向瓶内加入胰蛋白酶和EDTA混合液少许，以能覆满瓶底为限。
3. 置温箱中2~5分钟，当发现细胞质回缩，细胞间隙增大后，立即终止消化。
4. 吸除消化液，向瓶内注入Hanks液数毫升，轻轻转动培养瓶，把残余消化液冲掉。注意加Hanks液冲洗细胞时，动作要轻，以免把已松动的细胞冲掉流失，如用胰蛋白酶液单独消化，吸除胰蛋白酶液后，可不用Hanks液冲洗，直接加入培养液。
5. 用吸管吸取营养液轻轻反复吹打瓶壁细胞，使之从瓶壁脱离形成细胞悬液。
6. 计数板计数后，把细胞悬液分成等份分装入数个培养瓶中，置温箱中培养。
无菌操作注意事项
1. 操作前要洗手，进入超净台后手要用75%酒精或0.2%新洁尔灭擦试。试剂等瓶口也要擦试。
2. 点燃酒精灯，操作在火焰附近进行，耐热物品要经常在火焰上烧灼，金属器械烧灼时间不能太长，以免退火，并冷却后才能夹取组织，吸取过营养液的用具不能再烧灼，以免烧焦形成碳膜。
3. 操作动作要准确敏捷，但又不能太快，以防空气流动，增加污染机会。
4. 不能用手触已消毒器皿的工作部分，工作台面上用品要布局合理。
5. 瓶子开口后要尽量保持45℃斜位。
6. 吸溶液的吸管等不能混用。
初代培养 原理
将动物机体的各种组织从机体中取出，经各种酶（常用胰蛋白酶）、螯合剂（常用EDTA）或机械方法处理，分散成单细胞，置合适的培养基中培养，使细胞得以生存、生长和繁殖，这一过程称原代培养。
仪器、材料及试剂
仪器：培养箱（调整至37℃），培养瓶、青霉素瓶、小玻璃漏斗、平皿、吸管、移液管、纱布、手术器械、血球计数板、离心机、水浴箱（37℃）
材料：动物组织块
试剂：1640培养基（含20%小牛血清），0.25%胰酶，Hank′s液，碘酒
初代消化培养法
1. 准备：取各种已消毒的培养用品置于净化台面，紫外线消毒20分钟。开始工作前先洗手、75%酒精擦拭手至肘部。
2. 布局：点燃酒精灯，安装吸管帽。
3. 处理组织：把组织块置于烧杯中，用Hanks液漂洗2~3次，去除血污；如怀疑组织可能污染，可先置于含有青链霉素的混合液中30~60分钟。
4. 剪切：用眼科剪把组织切成2~3毫米大小的块，以便于消化。加入比组织块总量多30~50倍的胰蛋白酶液，然后一并倒入三角烧瓶中，结扎瓶口或塞以胶塞。
5. 消化：或用恒温水浴，或置于37℃温箱消化均可，消化中每隔20分钟应摇动一次，如用电磁恒温搅拌器消化更好。消化时间依组织块的大小和组织的硬度而定。
6. 分离：在消化过程中见消化液发混浊时，可用吸管吸出少许消化液在镜下观察，如组织已分散成细胞
团或单个细胞，立即终止消化，随即通过适宜不锈钢筛，滤掉尚未充分消化开的组织块。低速（500~1000转/分）离心消化液5分钟，吸出上清，加入适量含有血清的培养液。
7. 计数：用计数板计数，如细胞悬液细胞密度过大，再补加培养液调整后，分装入培养瓶中。对大多数细胞来说，pH要求在7.2~7.4范围，培养液呈微红色，如颜色偏黄，说明液体变酸，可用NaHCO3调整。
8. 培养：置于36.5℃温箱培养，如用CO2温箱培养，瓶口需用纱布棉塞或螺旋帽堵塞，纱布塞易生霉菌，每次换液时需要换新塞。
初代组织块培养法
1. 剪切：把组织小块置于小烧杯或青霉素小瓶中，用Hanks液漂洗二三次以去掉表面血污，吸静Hanks液，用眼科剪反复剪切1mm3块为止。
2. 摆布：用弯头吸管吸取若干小块，置于培养瓶中，用吸管弯头把组织小块摆布在培养瓶底部，小块相互距离以0.5cm为宜，每一25ml培养瓶底可摆布20~30块。
3. 轻轻翻转培养瓶，另瓶底向上，注意翻瓶时勿另组织小块流动，塞好瓶塞，置36.5℃温箱培养2小时左右（勿超过4小时），使小块微干涸。
4. 培养：从微箱中取出培养瓶，开塞，46度斜持培养瓶，箱瓶底脚部轻轻注入培养液少许，然后缓缓再把培养瓶翻转过来，让培养液慢慢覆盖附于瓶地上的组织小块。置温箱中静止培养。待细胞从组织块游出数量增多后。再补加培养液。
传代培养法
原理
细胞在培养瓶长成致密单层后，已基本上饱和，为使细胞能继续生长，同时
也将细胞数量扩大，就必须进行传代（再培养）。 传代培养也是一种将细胞种保存下去的方法。同时也是利用培养细胞进行各种实验的必经过程。悬浮型细胞直接分瓶就可以，而贴壁细胞需经消化后才能分瓶。
材料和试剂
1. 细胞：贴壁细胞株
2. 试剂：0.25％胰酶、1640培养基（含10％小牛血清）
3. 仪器和器材：倒置显微镜，培养箱、培养瓶、吸管、废液缸等
操作步骤
1. 吸除培养瓶内旧培养液。
2. 向瓶内加入胰蛋白酶和EDTA混合液少许，以能覆满瓶底为限。
3. 置温箱中2~5分钟，当发现细胞质回缩，细胞间隙增大后，立即终止消化。
4. 吸除消化液，向瓶内注入Hanks液数毫升，轻轻转动培养瓶，把残余消化液冲掉。注意加Hanks液冲洗细胞时，动作要轻，以免把已松动的细胞冲掉流失，如用胰蛋白酶液单独消化，吸除胰蛋白酶液后，可不用Hanks液冲洗，直接加入培养液。
5. 用吸管吸取营养液轻轻反复吹打瓶壁细胞，使之从瓶壁脱离形成细胞悬液。
6. 计数板计数后，把细胞悬液分成等份分装入数个培养瓶中，置温箱中培养。
无菌操作注意事项
1. 操作前要洗手，进入超净台后手要用75%酒精或0.2%新洁尔灭擦试。试剂等瓶口也要擦试。
2. 点燃酒精灯，操作在火焰附近进行，耐热物品要经常在火焰上烧灼，金属器械烧灼时间不能太长，以免退火，并冷却后才能夹取组织，吸取过营养液的用具不能再烧灼，以免烧焦形成碳膜。
3. 操作动作要准确敏捷，但又不能太快，以防空气流动，增加污染机会。
4. 不能用手触已消毒器皿的工作部分，工作台面上用品要布局合理。
5. 瓶子开口后要尽量保持45℃斜位。
6. 吸溶液的吸管等不能混用。
传代培养的细胞发生突变变成什么
传代培养细胞发生突变后，可能会出现不同的情况，具体变成什么类型的细胞取决于突变的类型和影响。下面是几种可能的情况：1.细胞恶变：某些细胞发生突变后，可能会失去正常细胞的生长控制机制，导致不受限制的生长和分裂，形成恶性肿瘤细胞。2.细胞凋亡：某些细胞发生突变后，可能会失去正常细胞的凋亡机制，导致细胞无法死亡，继续生长分裂，形成肿瘤细胞。3.细胞分化：某些细胞发生突变后，可能会失去正常细胞的分化能力，导致细胞不能转化为特定类型的细胞，而是保持幼稚状态，形成癌细胞或干细胞。4.细胞染色体异常：某些细胞发生突变后，可能会导致细胞染色体的数量、结构或排列异常，从而影响细胞的正常功能和特性。总之，传代培养细胞发生突变后可能会出现不同的情况，因此在细胞培养和研究中需要格外注意细胞的状态和特性。
